植物葉綠醇激酶ELISA試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中指標(biāo)表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中指標(biāo)相結(jié)合，經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）與待測樣品中植物葉綠醇激酶濃度呈正相關(guān)。擬合校準(zhǔn)品曲線，可以計(jì)算出樣本中植物葉綠醇激酶的濃度。
樣本準(zhǔn)備：
血清：采集后3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘，分離血清。
血漿：使用EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，3000轉(zhuǎn)/分離心30分鐘取上清。
組織勻漿：加生理鹽水搗碎組織，3000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘取上清。
所有樣本若不立即檢測，應(yīng)分裝凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融。
試劑準(zhǔn)備：
試劑盒在2-8℃保存，使用前室溫平衡20分鐘。
20×洗滌緩沖液按1：19比例用蒸餾水稀釋成1×工作液。
操作步驟：
取出所需板條，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔（S0-S5）和樣本孔。
標(biāo)準(zhǔn)品孔加50μL不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品；樣本孔先加10μL待測樣本，再加40μL樣本稀釋液。
每孔加入HRP標(biāo)記的檢測抗體100μL（空白孔除外），封板后37℃溫育60分鐘。
棄去液體，拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1分鐘后甩凈，重復(fù)5次。
每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分鐘。
每孔加終止液50μL，15分鐘內(nèi)于450nm波長下測定OD值。
結(jié)果計(jì)算：
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
根據(jù)樣本OD值在曲線上查得對應(yīng)濃度，乘以稀釋倍數(shù)（通常為5）即為實(shí)際濃度。
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更新時(shí)間：2026-05-12
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